賽默飛公司旗下NanoDrop One（NanoDrop One Micro volume UV-Vis Spectrophotometer）、NanoDrop OneC為代表的微量紫外可見(jiàn)光度計(jì)產(chǎn)品在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的大獲成功，最重要的原因就是應(yīng)時(shí)而生：只需區(qū)區(qū)2μL而非20μL、50μL、100μL、500μL甚至750μL樣品，就完成了核酸的純度（A260/A280、A260/A230）和濃度（A260）的測(cè)定工作，首先從樣品體積上實(shí)現(xiàn)了affordable。其次，測(cè)試中無(wú)須消耗一次性紫外透射型比色皿，無(wú)須進(jìn)行裝樣-測(cè)定-清洗比色皿-再重新上樣的重復(fù)操作。只需低廉、干凈的拭紙一角輕輕擦拭兩下，就可進(jìn)行下一個(gè)樣品的測(cè)定，時(shí)間和經(jīng)濟(jì)帳上更是affordable。
       在各種渠道和形式的宣傳中，NanoDrop系列微量紫外可見(jiàn)光度計(jì)儼然成了終身免校正、免維護(hù)的“國(guó)民紫外”。而對(duì)實(shí)驗(yàn)者和儀器管理人員，來(lái)之即用，用后關(guān)機(jī)，維護(hù)全免，正好落個(gè)清閑！
       那事實(shí)果真如此嗎？
       NanoDrop One、NanoDrop OneC的共同工作部件有觸摸屏、檢測(cè)臂和樣品基座。此外，NanoDrop OneC配置有比色皿檢測(cè)模塊，用于完成動(dòng)力學(xué)測(cè)試、OD600細(xì)胞/菌體濃度測(cè)定、GMP等規(guī)范所要求的稀釋樣品檢測(cè)等由常規(guī)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)擔(dān)負(fù)的工作。撇開(kāi)觸摸屏、比色皿模塊這兩部分，NanoDrop儀器常規(guī)樣品測(cè)試中，到底有哪些不可或缺的維護(hù)規(guī)程？

一、檢測(cè)基座工作面的清潔（Cleaning the Pedestals）
       檢測(cè)基座工作面包括上基座（upper pedestal，可升降的檢測(cè)機(jī)械臂接觸樣品的部分）和下基座（lower pedestal，底座上承接液樣的突起柱頭）。上下基座外圍為白色303不銹鋼材質(zhì)，正中為可透射紫外的石英光學(xué)玻璃窗。

       光學(xué)窗口殘留的液體、普通擦拭用的紙巾纖維以及實(shí)驗(yàn)室塵埃顆粒、化學(xué)染料附著，都直接干擾吸光度測(cè)定值。故基座的仔細(xì)清潔是必不可少的操作環(huán)節(jié)。
       基座清理分為測(cè)試樣品間隔的清潔、不同實(shí)驗(yàn)樣品測(cè)定后的清潔和測(cè)定中發(fā)生樣品污染的清理。
1.1 兩個(gè)樣品測(cè)試間隔的基座清潔
       由于NanoDrop系列儀器都是利用液體表面張力作用形成的微細(xì)液柱來(lái)測(cè)試，光路要從上基座穿透液柱進(jìn)入下基座后進(jìn)行檢測(cè)器。因此，清潔時(shí)應(yīng)抬起儀器檢測(cè)臂，上、下基座全擦遍，而非只把下基座圓柱頭一擦了事。忽略擦拭上基座或擦拭不細(xì)致，殘留細(xì)微液珠勢(shì)必造成樣品交叉污染，失去精確測(cè)定的意義。

 
       清潔應(yīng)使用適合于潔凈間、精密光學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)備用的專業(yè)無(wú)絨低塵擦拭紙（譬如金佰利公司Kimwipes小綠盒低塵擦拭紙等），而非日常生活普通清潔紙巾。 

1.2不同用戶上機(jī)前后的基座清潔
       建議每個(gè)新用戶在第一次空白對(duì)照樣品檢測(cè)或樣品檢測(cè)前和每批樣品檢測(cè)結(jié)束后，使用去離子水(deionized water，DI H2O)或?qū)嶒?yàn)室二級(jí)純水（RO反滲透水）、實(shí)驗(yàn)室無(wú)塵紙，對(duì)樣品基座進(jìn)行徹底清理。

       規(guī)范操作手法是：
1）抬起檢測(cè)臂，用新的實(shí)驗(yàn)室無(wú)塵紙擦拭上下基座；
2）用移液器吸取將 3–5μL去離子水添加至下基座；
3）降下檢測(cè)臂保持2分鐘；
4）抬起檢測(cè)臂，用新的無(wú)塵紙擦拭上下基座。 

1.3 污染發(fā)生后的徹底清理
       當(dāng)出現(xiàn)樣品底座肉眼可見(jiàn)的殘留（如遺留在基座上的干燥樣品），需使用0.5M的稀鹽酸（HCL）按照1.2步驟進(jìn)行初次清理，然后用去離子水執(zhí)行1.2流程。

二、檢測(cè)基座的修復(fù)（Reconditioning the Pedestals）
       NanoDrop One、NanoDrop OneC微量紫外可見(jiàn)光度計(jì)是利用液體表面張力作用，通過(guò)特殊樣品滯留系統(tǒng)（液體接觸界面），使微量液體在上、下基座間的空隙形成一個(gè)細(xì)小液柱。上基座內(nèi)嵌入的光纖線纜連接氙燈光源，下基座內(nèi)嵌入的線纜連接檢測(cè)器。檢測(cè)臂降下時(shí)，光從上而下通過(guò)液柱到達(dá)下底座進(jìn)入檢測(cè)器，從而生成吸光度與樣品光吸收光譜數(shù)據(jù)曲線。
       拉伸光學(xué)液柱的測(cè)量技術(shù)對(duì)液體表面張力特征存在依賴。表面張力大的樣品可以正常檢測(cè)，而表面張力小，樣品容易出現(xiàn)液柱拉斷，使測(cè)量失效。
       已知測(cè)試樣品的溫度（溫度升高表面張力減?。?、鹽分含量（水溶液加入無(wú)機(jī)鹽后表面張力增大；而低鹽溶液，如脫鹽后的蛋白溶液，表面張力要減少）、非極性溶劑（一般指烷烴，如正己烷、庚烷、苯、甲苯等），表面活性劑/去污劑（如SDS、Triton X100、消泡劑存在的液體樣品，表面張力降低）殘留等多種因素均可顯著樣品溶液表面張力。

       此外，與液體接觸的基座表面的疏水狀態(tài)，對(duì)液體獲得足夠大的表面張力極為關(guān)鍵。
       正常使用情況下，隨著使用時(shí)間推移，NanoDrop檢測(cè)基座的表面也可能會(huì)失去其“已調(diào)節(jié)”的屬性，特別是在使用含有異丙醇或表面活性劑（如Bradford法蛋白定量試劑）的溶液測(cè)量后(The pedestal surfaces may lose their “conditioned” properties over time, especially after measurements with isopropyl alcohol or solutions that contain surfactants or detergents such as the Bradford reagent. )，基座表面處于未調(diào)節(jié)（unconditioned）的狀態(tài)?！拔凑{(diào)節(jié)”基座會(huì)導(dǎo)致滴加在下基座的液滴“變平”，在檢測(cè)臂降下時(shí)阻礙正常形態(tài)液柱的形成，由此產(chǎn)生的光譜可能看起來(lái)顯得“粗糙”或呈“鋸齒狀”。
       因此，檢測(cè)基座需要定期維護(hù)以保持檢測(cè)的完整性。這一點(diǎn)適用于所有NanoDrop系列單道（如NanoDrop 1000、NanoDrop 2000/2000C、 NanoDrop One/One C、NanoDrop Lite、NanoDrop Lite Plus）、多道（NanoDrop 8000、NanoDrop Eight微量紫外可見(jiàn)光度計(jì)。
       無(wú)論何時(shí)，當(dāng)液滴樣品在基座上呈現(xiàn)扁平形狀（而不是串成“微珠”或形成飽滿的圓形液滴），或液柱在檢測(cè)期間碎裂，則須立即對(duì)基座修復(fù)以恢復(fù)其表面疏水特性。

2.1 專用基座修復(fù)試劑法
       基座修復(fù)需用到無(wú)絨實(shí)驗(yàn)室無(wú)塵紙、移液器(0–2.5μL)和PR-1基座修復(fù)試劑盒。PR-1 基座修復(fù)試劑是一種專門(mén)配制的調(diào)整化合物，涂抹到樣品基座工作表面以恢復(fù)其疏水狀態(tài)。
       修復(fù)基座操作步驟為：
1）用點(diǎn)樣棒蘸取PR-1基座修復(fù)試劑；
2）抬起檢測(cè)臂并保持此狀態(tài)，在上、下基座表面均勻的涂上薄薄的一層修復(fù)化合物，保持約30秒使PR-1化合物自然揮發(fā)干燥；
3）將干凈的實(shí)驗(yàn)室無(wú)塵紙折疊成合適大小，一只手支撐檢測(cè)臂避免損壞檢測(cè)臂，擦拭上下基座表面。正常情況下，無(wú)塵紙變?yōu)楹谏砀街诨砻娴奈蹪n被有效去除；
4）重復(fù)步驟3，直到上下基座表面擦拭干凈為止；
5）用洗耳球等吹掃去除殘留在基座上的任何紙屑及雜質(zhì)；
6）驗(yàn)證修復(fù)效果：將1μL去離子水滴加至下基座，水珠串成“微珠”或形成一個(gè)圓形液滴，即代表基座成功復(fù)性。

2.2 稀鹽酸修復(fù)法
       PR-1 基座修復(fù)化合物是修復(fù)基座最簡(jiǎn)單的方法。如果實(shí)驗(yàn)室并無(wú)PR-1試劑盒儲(chǔ)備，則可用HCL和去離子完成修復(fù)工作，操作步驟如下：
1）抬起儀器檢測(cè)臂并將 3μL 0.5M HCL滴加至下基座；
2）降下檢測(cè)臂并保持2–3分鐘；
3）抬起檢測(cè)臂，用實(shí)驗(yàn)室無(wú)塵紙擦拭上下基座；
4）將 3μL 去離子誰(shuí)滴加至下基座，以清除HCL；
5）降下檢測(cè)臂并保持2–3分鐘；
6）抬起檢測(cè)臂，用無(wú)塵紙擦拭上下基座；
7）用洗耳球等吹掃去除殘留在基座上的任何紙屑雜質(zhì)。

參考文獻(xiàn)：
NanoDrop Micro-UV/Vis Spectrophotometer User Guide (Rev. E)
NanoDrop 微量紫外/可見(jiàn)光分光光度計(jì)用戶手冊(cè) (Rev. B)
Solvent Compatibility and Utility（Nanodrop Instruments Technical Bulletin）