成大業(yè)若烹小鮮-2

      《聯(lián)排管蓋操作工具在PCR實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用價(jià)值淺析》闡釋了PCR實(shí)驗(yàn)反應(yīng)孔密封的重要性。在PCR/qPCR運(yùn)行前嚴(yán)密封板，可防止PCR板孔內(nèi)液體蒸發(fā)、降低實(shí)驗(yàn)誤差并減少孔與孔之間的交叉污染。

      粘性密封膜是一面敷有壓力敏感型膠粘劑（pressure sensitive adhesive，簡稱壓敏膠）的透明膜。揭去襯膜后，用手指或滾輪等輔助工具施壓，可使壓敏劑流動(dòng)并粘附可接觸到的光潔表面。粘貼中施加足夠的壓力對(duì)于良好密封至關(guān)重要。因此，在推擠封膜膠粘劑背面的同時(shí)，要對(duì)向下施加適度的壓力（至少達(dá)到每平方厘米1公斤壓強(qiáng)），以便膠在密封工作表面均勻敷布，使膜、板貼合緊密。

      PCR板密封膜法操作中，使用必要工具協(xié)助，可確保反應(yīng)孔牢固密封。為此，我們對(duì)幾款常用PCR板密封工具加以總結(jié)。

一、封板膜刮板

      Adhesive Seal Applicator or Adhesive Film Applicator，即粘性密封膜刮板或封板膜刮板。顧名思義，就是用刮板在PCR板面上前后、左右推擠和刮擦封膜，使密封膜平整、全面覆蓋所有反應(yīng)孔。

      與常見的磁卡、門禁卡比，封板膜刮板的邊緣更厚實(shí)和圓滑，避免銳利邊角劃破密封膜。為方便戴手套時(shí)操作，刮板的一側(cè)或中央加厚，往往還設(shè)有水平紋路或圓滑突起，便于握緊、并在刮擦過程中向下對(duì)膜施加壓力。

          封板膜刮板(4333183)                   封板膜刮板(AB1391)              Adhesive Seal Applicator(4ti-0503)

使用刮板密封PCR板的操作步驟為：

      1）手持刮板并稍微用力向下壓板，沿著PCR板長邊往復(fù)刮密封膜背面，使封板膜與反應(yīng)板朝上一面貼合；

      2）PCR板旋轉(zhuǎn)90°，用相同方法沿著PCR板短邊刮膜；

      3）豎起刮板，用刮板的一邊或一角，沿著PCR板反應(yīng)孔陣列四周，緊貼其邊緣壓緊封板膜。

刮蹭長邊                            刮蹭短邊                             壓實(shí)外圍

       4）豎起刮板，在所有反應(yīng)孔之間縫隙，逐行、逐列用刮板推壓，確保膜完全包裹反應(yīng)孔開口及周邊板面。

      刮板使用靈活，對(duì)各種PCR板型都具有很強(qiáng)的適應(yīng)性，常被PCR封板膜廠家選作配套附件。賽默飛旗下除Miniamp、Miniamp Plus以及GeneAmp2700、9700等少數(shù)機(jī)型外，封板膜刮板作為包括Simpliamp、Veriti、VeritPro、ProFlex PCR儀以及Steopne Plus、QuantStudio 1/3/5、7300/7500/7500 Fast熒光定量PCR系統(tǒng)啟動(dòng)工具套件的必備組件隨機(jī)提供。

二、封板膜滾筒

      Film Sealing Roller or Adhesive Seal Roller，即膠粘密封滾筒或封板滾筒。

      滾筒采用剛性手柄便于施力，而中等硬度橡膠材質(zhì)滾輪，更適應(yīng)PCR反應(yīng)板表面的凹凸，不損傷封板膜。

      Adhesive Seal Roller                             Film Sealing Roller（MSR0001）                    Sealing Film Roller   

      將封板膜工作面與PCR對(duì)齊并覆蓋全板，用滾筒前后左右來回往復(fù)碾壓幾遍，可將膜緊密貼牢在 PCR板上，確保96/384孔板上每個(gè)孔都被均勻、嚴(yán)實(shí)密封。

      從工作原理可知，滾筒最適于無突起邊緣且反應(yīng)孔開孔高度與板面大致平齊型的24孔、32孔、48孔、96孔、384孔PCR板。 

三、96孔封板膜壓墊

      Optical Film Compression Pads or Optical Compression Film Sealing Pad，即光學(xué)封膜壓墊或光學(xué)封板壓墊，由一層軟硅泡沫墊夾心層與具有優(yōu)良熱穩(wěn)定型PTFE（Teflon）表層加工而成的薄板。

      板上有96個(gè)開孔，孔大小、位置與PCR板反應(yīng)孔一一對(duì)齊，反應(yīng)管內(nèi)的光學(xué)信號(hào)可從反應(yīng)孔內(nèi)射出和被檢測，特別適合實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀使用。

      將壓墊開孔與PCR板所有反應(yīng)孔對(duì)齊后，按壓墊板，可使密封膜與PCR板面、各反應(yīng)孔360°均勻緊密貼合，確保安全密封。

      光學(xué)封膜壓墊一次完成96個(gè)反應(yīng)孔密封，操作簡便、高效，可替代封板刮板、封板滾筒用于熒光定量PCR板封板。

      光學(xué)封板壓墊常與光學(xué)透明密封膜組成光學(xué)封板膜套件（MicroAmp Optical Adhesive Film Kit, 4313663），作為PCR啟動(dòng)工具包組件隨賽默飛9700，2720 PCR儀和7900HT, QuantStudio ,ViiA 7實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀提供。

       伯樂則將光學(xué)封板壓墊（ADR3296）搭配Microseal B封板膜組成光學(xué)PCR封板套裝（Optical Film Sealing Kit）用作DNA Engine Opticon 2和Chromo4熒光定量PCR儀的標(biāo)準(zhǔn)附件。 

4、PCR樣品管架

      賽默飛的96-Well Support Base 或伯樂的96-place rack，即PCR樣品基座，又稱PCR管架，可在光滑實(shí)驗(yàn)臺(tái)面穩(wěn)妥有效支持和固定PCR管、聯(lián)排管和PCR反應(yīng)板。

      在PCR板封板操作中，將PCR板安置于基座上，防止在使用滾筒和刮板推壓操作中反應(yīng)板位置移動(dòng)，影響封板效果。因此，在封板膜密封操作中，無論是使用封板膜滾筒、封板膜刮板還是96孔板，常建議將 PCR反應(yīng)板放置在PCR樣品基座上或循環(huán)儀樣品基座中進(jìn)行，確屬良心建議。

參考文獻(xiàn)

How to Use MicroAmp Reaction Plates,Tube-Strips and Tubes, Rev. A