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Applied Biosystems實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

StepOne Plus快速實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是Applied Biosystems首款采用觸摸屏控制、VeriFlex溫度梯度控制模塊的qPCR，支持快速PCR反應(yīng)和四重?zé)晒舛糠治?。本欄目提供其配置及OQ/IQ服務(wù)套餐方案。

設(shè)備名稱：實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 qPCR儀 real-time PCR system

制 造 商：美國Thermo Fisher公司       產(chǎn)地：新加坡

品    牌：Applied Biosystems（AB）

型    號：StepOne（48×0.1mL）

             StepOne Plus（96×0.1mL）

技術(shù)詳情：見［技術(shù)規(guī)格］

商品報(bào)價(jià)：見［訂貨指南］

主要功能用途
StepOne Plus系列實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是Applied Biosystems第一款采用觸摸屏操作控制、引入VeriFlex溫度梯度控制模塊的qPCR平臺。可實(shí)現(xiàn)在同一次實(shí)驗(yàn)中分別設(shè)置6組不同引物退火溫度以確立最佳擴(kuò)增條件，升溫速度快可支持快速PCR反應(yīng)（StepOne不適用）。采用4組熒光檢測通道（StepOne為3通道），可實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒舛糠治鰴z測。
主要應(yīng)用包括：
1、基因表達(dá)分析
動植物和微生物在生理病理、環(huán)境及外來脅迫下相關(guān)基因表達(dá)的變化分析以及SiRNA誘導(dǎo)基因沉默和基因敲除后特定基因表達(dá)水平的檢測。
2、miRNA表達(dá)水平的檢測
基于miRNA與特定靶基因mRNA表達(dá)水平變化間的關(guān)聯(lián)，研究miRNA 調(diào)控基因表達(dá)機(jī)制。
3、基因分型（SNP genotyping，Genotyping）
利用TaqMan探針、飽和DNA染料HRM曲線分析進(jìn)行基因分型，得出等位基因頻率、基因型占總基因型比率等?？蓱?yīng)用于如遺傳病診斷，SNP基因分型，藥物代謝酶DME基因分型，法醫(yī)遺傳學(xué)鑒定等。
4、拷貝數(shù)變異(CNV)
拷貝數(shù)變異(Copy number variation, CNV)是指因基因組發(fā)生重排而導(dǎo)致長度1KB以上的基因片段的缺失（減少）、插入、重復(fù)（增加）、重排、倒 位、DNA 拷貝數(shù)目變化，也稱為拷貝數(shù)多態(tài)性(copy number polymorphisms, CNPs）。是造成物種個(gè)體差異和人類許多疾?。ㄈ绨┌Y、遺傳性疾病、心血管疾病）的一種重要遺傳基礎(chǔ)。熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測初始樣品的某個(gè)DNA 片段的拷貝數(shù)進(jìn)行定量，用已知拷貝數(shù)為2的DNA內(nèi)參校正而實(shí)現(xiàn)對目DNA 片段拷貝數(shù)的確認(rèn)。
5、高分辨率溶解曲線分析（High resolution melt， HRM）
DNA序列長度、GC 含量及堿基互補(bǔ)性差異影響DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的熱穩(wěn)定性。高分辨熔解曲線(high-resolution melt，HRM) 分析是通過實(shí)時(shí)監(jiān)測升溫過程中與雙鏈DNA特異性結(jié)合的熒光染料釋放的綠色熒光強(qiáng)度的變化，了解PCR 產(chǎn)物中DNA分子的解鏈溫度情況，分析樣品特定基因片段DNA組成變化。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)運(yùn)行程序中引入溶解曲線分析環(huán)節(jié)后，可借助于專用HRM分析模塊完成HRM分析。HRM用于突變掃描和基因分型，不受突變堿基位點(diǎn)和種類限制，既可對未知突變進(jìn)行篩查、掃描，又能對已知突變進(jìn)行分析，還可用于STR分析。
6、病原體檢測（Pathogen detection）
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀能可靠用于臨床醫(yī)學(xué)人體上呼吸道的感染、肺炎、消化道感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等疾病，以及畜牧業(yè)、農(nóng)作物病蟲害的病原體的檢測確認(rèn)、感染嚴(yán)重程度的量化評估。
7、蛋白熱穩(wěn)定性分析（Protein thermal shift）
利用實(shí)時(shí)定量PCR儀來分析熱穩(wěn)定性，進(jìn)行配體-蛋白結(jié)合的高通量篩選，突變或修飾對蛋白熱穩(wěn)定性的影響
使用蛋白結(jié)合染料（如Protein Thermal Shift 染料），實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)上運(yùn)行實(shí)時(shí)熔解實(shí)驗(yàn)，根據(jù)因蛋白熔解導(dǎo)致熒光圖像差異，分析配體與蛋白的結(jié)合穩(wěn)定性?？捎糜谝愿咄亢Y選配體與蛋白的結(jié)合， 篩選能與蛋白靶點(diǎn)結(jié)合的小分子和片段文庫候選藥物、抗體，鑒定最佳緩沖液條件以改善蛋白的純化和分離等。
8、食品安全和GMO(genetically modified organism)檢測
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)用于食品的微生物污染監(jiān)測、肉食類食品食材來源和組成的檢驗(yàn)、如轉(zhuǎn)基因動植物基因的檢測等。
9、耐藥基因檢測等


性能特點(diǎn)
StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀具有直觀簡便的操作界面和的實(shí)驗(yàn)設(shè)置向?qū)?，既可以通過彩色觸摸屏操作，也可與PC聯(lián)機(jī)采用StepOne Software進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作和數(shù)據(jù)分析處理。精確溫控反應(yīng)模塊及先進(jìn)光學(xué)檢測單元，支持廣泛的研究和檢測應(yīng)用。
1、功能強(qiáng)大、操作簡便的StepOne軟件
PCR實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)向?qū)В龑?dǎo)用戶執(zhí)行實(shí)驗(yàn)的各個(gè)步驟，包括樣本和反應(yīng)設(shè)置、熱循環(huán)和熒光檢測等。高級設(shè)置適用于進(jìn)行更復(fù)雜應(yīng)用(如多重反應(yīng))的高級用戶；
實(shí)時(shí)監(jiān)視擴(kuò)增增長曲線，即時(shí)查看實(shí)驗(yàn)進(jìn)程；
還可通過一臺遠(yuǎn)程計(jì)算機(jī)實(shí)時(shí)查看擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，并在運(yùn)行完成時(shí)通過電子郵件提醒通知；
自動基線和白動閾值功能令數(shù)據(jù)分析得以簡化；
自動單核苷酸多態(tài)性基因分型識別功能，具有直觀的圖表輸出和量值分配特性；
當(dāng)查看擴(kuò)增曲線或單核苷酸多態(tài)性基因分型圖譜時(shí)，易于識別樣本反應(yīng)孔；
StepOne軟件支持包括標(biāo)準(zhǔn)曲線絕對定量、比較Ct(ΔΔCt)相對定量、等位基因鑒別（SNP Genotyping)、陽性/陰性等多種分析方法；
StepOne Software軟件集成高分辨率熔解曲線(High Resolution Melt/HRM)應(yīng)用模塊。HRM 軟件改進(jìn)聚類算法，提高了靈敏度和準(zhǔn)確性，并能夠?qū)蝹€(gè)板上運(yùn)行的多個(gè)檢測進(jìn)行單獨(dú)分析。
還可選擇符合MIQE 標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR數(shù)據(jù)標(biāo)記語言(RDML)格式輸出實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

2、VeriFlex 梯度控溫技術(shù)
StepOne Plus的96孔反應(yīng)模塊采用Veriflex梯度溫控技術(shù)，具有六個(gè)獨(dú)立的溫度區(qū)，可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的溫度控制和優(yōu)化。

3、多重實(shí)時(shí)定量分析功能
具有最多可支持4個(gè)靶標(biāo)的多重實(shí)時(shí)熒光定量檢測功能。

主要技術(shù)規(guī)格

Applied Biosystems提供的StepOne系列實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀分為StepOne Plus、StepOne兩款。二者的樣品反應(yīng)模塊、熒光檢測通道數(shù)量均存在一定差異。

型號

StepOne Plus（4熒光通道）

StepOne（3熒光通道）

樣品通量

96孔×0.1 mL

48孔×0.1 mL

支持的耗材

0.1mL 96孔反應(yīng)板與光學(xué)蓋膜

0.1 mL96孔反應(yīng)板與光學(xué)平蓋

0.1 mL 8連管與光學(xué)平蓋

0.1 mL單管與光學(xué)平蓋

0.1mL 48孔反應(yīng)板與光學(xué)蓋膜

0.1 mL 48孔反應(yīng)板與光學(xué)平蓋

0.1 mL 8連管與光學(xué)平蓋

0.1 mL單管與光學(xué)平蓋

反應(yīng)體積

10～30μL

熱循環(huán)控溫類型

Peltier-Based   System

溫度梯度分區(qū)功能

6個(gè)可獨(dú)立控制的溫控區(qū)域

-

最大模塊變溫速率

6.5℃/秒

4.6℃/秒

最大樣品變溫速率

快速模式2.2℃/秒；

標(biāo)準(zhǔn)模式1.6℃/秒

溫度準(zhǔn)確度

±0.25℃ (35℃至95℃范圍時(shí)鐘啟動后3分鐘開始測量)

溫度均一性

±0.4℃(35℃至95℃范圍時(shí)鐘啟動后30秒測量)

PCR完成運(yùn)行時(shí)間

<30分鐘運(yùn)行

<40分鐘運(yùn)行

光學(xué)檢測性能

激發(fā)光源

OptiFlex Blue   LED光源

LED

激發(fā)/檢測波長范圍

450–600   nm/500–640 nm

熒光檢測通道

4個(gè)熒光通道

3個(gè)熒光通道

熒光激發(fā)波長

4組激發(fā)濾光片

CH1：470±15nm

CH2：520±10nm

CH3：550±10nm

CH4：580±10nm

3組激發(fā)濾光片

CH1：470±15nm

CH2：520±10nm

CH3：580±10nm

熒光檢測波長

4組發(fā)射濾光片

CH1：520±15nm/適用于FAM/SYBR Green(預(yù)校準(zhǔn))；SYT09

CH2：558±12nm/適用于VIC/ JOE (預(yù)校準(zhǔn))；HEX, TET

CH3：587±10nm/適用于NED/TAMRA /ABY (預(yù)校準(zhǔn))；Cy3

CH4：623±14nm/適用于JUN/ROX(預(yù)校準(zhǔn))；Texas Red

4組發(fā)射濾光片

CH1：520±15nm/適用于FAM/SYBR Green(預(yù)校準(zhǔn))；SYT09

CH2：558±12nm/適用于VIC/ JOE (預(yù)校準(zhǔn))；HEX, TET

CH3：623±14nm/適用于JUN/ROX(預(yù)校準(zhǔn))；Texas Red

多重分析能力

最多4個(gè)靶點(diǎn)

最多3個(gè)靶點(diǎn)

動態(tài)范圍

9個(gè)數(shù)量級的線性動態(tài)范圍

靈敏度

TaqMan單一報(bào)告基因分析30μL體系中檢測1拷貝RNaseP模板

精密度

分辯5000至10000個(gè)RNaseP模板拷貝(置信度997％)

運(yùn)行時(shí)間

快速PCR模式：完成40個(gè)循環(huán)的反應(yīng)＜40分鐘

標(biāo)準(zhǔn)PCR模式：完成40個(gè)循環(huán)的反應(yīng)＜2小時(shí)

 

安裝運(yùn)行條件

StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀在海拔2km以下使用

工作環(huán)境溫度：15℃ ~ 30℃（推薦）

工作電源：100-240V/50-60Hz/10A；960 W

相對濕度范圍：15  ~  80%R.H.

主機(jī)重量：23.6 kg

外觀尺寸尺寸（W×D×H）：270×500×400 mm

 

組成配置

Applied Biosystems StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀由定量PCR儀主機(jī)、外置電腦工作站、PCR Starter Kit和隨機(jī)軟件包（StepOne Real-Time PCR System Software、Primer Express Software)等組成。

主機(jī)標(biāo)準(zhǔn)附件包括電源電纜（power Cable）、USB數(shù)據(jù)線（StepOne system Cable）、網(wǎng)線（Ethernet cable）和USB drive（含電子文檔）。

Applied Biosystems 提供了HRM分析軟件和SEA審計(jì)管理軟件可供選擇。

選配USB接口的無線網(wǎng)卡，便于將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)聯(lián)網(wǎng)傳輸。

品名

品牌

貨號

規(guī)格

中文描述

單價(jià)

HRM分析功能軟件

Applied Biosystems

4486395

Each

HRM Software Module

for QuantStudio 6 and 7 Systems

詢價(jià)

詢價(jià)

21CFR Part11審計(jì)管理軟件

Applied Biosystems

4486400

Each

21CFR Part11 Software Module

For QuantStudio 6 and 7 Systems

詢價(jià)

詢價(jià)

WiFi網(wǎng)絡(luò)模塊

Applied Biosystems

A26774

each

High-Power USB Wi-Fi Module,

Maximum speed up to 300 Mbps.

Use with SimpliAmp ProFlex, QuantStudio 1/3/5.

詢價(jià)

 

 

基本耗材

 

StepOne Plus、StepOne兩款實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀分別配置的是96×0.1 mL、48×0.1 mL的快速反應(yīng)模塊。適用于快速熒光定量PCR管、PCR聯(lián)排管或PCR板。

為使得反應(yīng)管、反應(yīng)板與反應(yīng)模塊的緊密貼合、熱傳導(dǎo)效率均勻一致，建議采用通過Applied Biosystems儀器兼容性測試的 MicroAmp系列，以確保獲得精確、可重復(fù)的PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

品名

品牌

貨號

規(guī)格

描述

報(bào)價(jià)

96孔快速熒光定量PCR板

Applied Biosystems

4346907

10板/盒

MicroAmp EnduraPlate

Fast Optical 96-Well Reaction Plate, 0.1 mL

詢價(jià)

快速熒光定量PCR板

彩色組合裝

Applied Biosystems

4483493

5板/盒

MicroAmp EnduraPlate Optical 96-Well Fast

Multicolor Reaction Plates with Barcode

詢價(jià)

定量PCR 8聯(lián)平蓋

Applied Biosystems

4323032

300條/盒

MicroAmp Optical 8-Cap Strips，F(xiàn)lat , Clear

詢價(jià)

快速熒光定量PCR單管

Applied Biosystems

4358297

1000 支/盒

MicroAmp Fast Reaction Tube with Flat Cap,

Clear, 0.1 mL

詢價(jià)

定量PCR封板膜

Applied Biosystems

4360954

25張/盒

MicroAmp Optical Adhesive Film

詢價(jià)

48孔快速熒光定量PCR板

Applied Biosystems

4375816

20板/盒

MicroAmp Fast Optical 48-Well Plate

詢價(jià)

48孔定量PCR板封膜

Applied Biosystems

4375928

25張/盒

MicroAmp 48-Well Optical Adhesive Film

詢價(jià)

 

 

訂貨指南

Applied Biosystems StepOne Plus系列實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀提供無電腦工作站、帶臺式電腦或便攜式電腦工作站三種配置套裝。電腦工作站預(yù)裝有StepOne Software、Primer Express Software應(yīng)用軟件。

序號

品名

貨號

套裝配置描述

報(bào)價(jià)

1-1

Stepone Plus 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

4376600

Applied Biosystems StepOne Plus Real-Time PCR System

Includes：

StepOne Plus qPCR instrument with 96-well Fast VetiFlex Block

StepOne Plus Starter Kit

詢價(jià)

詢價(jià)

1-2

StepOnePlus實(shí)時(shí)熒光定量PCR

工作套裝

4376599

Applied Biosystems StepOne Plus Real-time PCR Systems

Includes：

Stepone Plus qPCR System (4376600)

Dell tower computer

詢價(jià)

詢價(jià)

1-3

StepOnePlus實(shí)時(shí)熒光定量PCR

工作套裝

4376598

Applied Biosystems StepOnePlus Real-time PCR Systems

Includes：

Stepone Plus qPCR System (4376600)

Dell laptop computer

詢價(jià)

詢價(jià)

2-1

Stepone實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

4376357

Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR System

Includes：

StepOne qPCR instrument with 48×0.1mL Block

StepOne Plus Starter Kit

詢價(jià)

詢價(jià)

2-2

StepOne實(shí)時(shí)熒光定量PCR

工作套裝

4376374

Applied Biosystems StepOne Real-time PCR Systems

Includes：

Stepone qPCR System (4376357)

Dell tower computer

詢價(jià)

詢價(jià)

2-3

StepOne實(shí)時(shí)熒光定量PCR

工作套裝

4376373

Applied Biosystems StepOne Real-time PCR Systems

Includes：

Stepone qPCR System (4376357)

Dell laptop computer

詢價(jià)

詢價(jià)

對于有GLP、FDA、CFDA管理合規(guī)要求的實(shí)驗(yàn)，Applied Biosystems為StepOne、StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀提供了專門的2Q驗(yàn)證服務(wù)套餐。

序號

品名

貨號

套裝配置描述

報(bào)價(jià)

3-1

StepOne IQ/OQ服務(wù)套餐

4413678

IQ/OQ,SVC StepOne

詢價(jià)

3-2

StepOne Plus IQ/OQ服務(wù)套餐

4415138

IQ/OQ,SVC StepOne Plus

詢價(jià)